Fue Zarlino el primero en establecer la doble modalidad en sus tratados. Fue tambien consciente de la necesidad de ajustar la afinación de los instrumentos. Este desarrollo y perfeccionamiento llevaría a la aplicación del temperamento igual de la escala, dividiendo la octava en doce semitonos iguales.
Descubrió la serie armónica mediante la observación de la vibración de las cuerdas.